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饲料中维生素A的测定
2020.07.06   点击292次

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

LC1620A 高效液相色谱仪(上海舜宇恒平科学仪器有限公司);

FA2004 电子分析天平(上海舜宇恒平科学仪器有限公司);

甲醇(色谱纯,美国Tedia),维生素A 标准品(纯度>95%,阿拉丁试剂)。

1.2 标准溶液的配制

参考GB/T 17817-2010 饲料中维生素A 的测定高效液相色谱法,配制浓度为3.44μg/ml 的标准工作液。

1.3 色谱条件

色谱柱:Shodex C18-100-4D(4.6×150mm)

流动相:甲醇:水(95:5)

流速:1.0ml/min

柱温:室温

进样量:20μl

检测波长:326nm

2 实验结果

2.1 精密度

将1.2 中所配制的3.44μg/ml 标准溶液,在1.3 描述的高效液相色谱条件下进样,重复进样五次,结果如表1 所示RSD 均在1.0%以内。

表1 精密度实验结果

No保留时间峰高峰面积
15.49366.302725.623
25.46866.832712.594
35.46366.948713.915
45.47266.631714.214
55.48966.102716.8
平均值5.47766.563716.629
RSD0.24%0.53%0.73%

图1 标准品谱图

2.2 标准曲线

将1.2 中所配制的标准待测溶液逐级稀释为1.29μg/ml、0.86μg/ml、0.43μg/ml、0.07μg/ml 不同浓度,在1.3 描述的高效液相色谱条件下由低浓度开始进样,所得标准曲线结果如下:

2.3 实际样品测定

参考GB/T 17817-2010 第一法皂化提取法对饲料样品进行处理,具体步骤如下:

1、皂化:称取试样5g,置于250ml圆底烧瓶中,加入50ml的L-抗坏血酸乙醇溶液(5g/L),使试样完全分散、浸湿,加10ml氢氧化钾溶液(500g/L),摇匀。置于沸水浴中回流30min,不时振荡。皂化结束后,分别用5ml无水乙醇、5ml水自冷凝管顶端冲洗,取出烧瓶冷却至40℃;

2、提取:定量转移全部皂化液于盛有100ml二氯甲烷的500ml分液漏斗中,用50ml水分3次冲洗圆底烧瓶并入分液漏斗,加盖、放气、随后混合,激烈振荡2min,静置、分层。同样操作三次,合并二氯甲烷相。用水100mL 洗涤二氯甲烷提取液至中性。后用无水硫酸钠脱水,转移至250ml棕色容量瓶中,加100mgBHT 溶解,用二氯甲烷定容至刻度。

3、浓缩:从二氯甲烷提取液中分取10ml,氮吹浓缩至近干。残渣以甲醇溶解,定容至1ml。用甲醇稀释100倍,经0.45μm滤膜过滤,作为待测样品溶液。

待测溶液在1.3 描述的高效液相色谱条件下进样,所得结果如下:

待测溶液峰面积
浓度(μg/ml)
标准品
739.327
3.44
样品
893.989
4.16

按称量样品量及稀释倍数计算得实际样品含量为2.08×103mg/kg。

图2 实际样品谱图

3 结论

采用LC1620A 高效液相色谱仪,参考GB/T 17817-2010 的方法对维生素A 进行分析,分析精密度与线性关系结果良好,并对实际样品进行分析,分离检出良好,符合国家标准的分析需要。

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